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miR-9对甲状腺乳头状癌干细胞体外增殖及迁移能力的影响

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文章附图

图片介绍

图1 ALDH1 阳性甲状腺乳头状癌干细胞与 ALDH1 阴性甲状腺乳头状癌细胞内 miR-9 基因的表达

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结果:qRT-PCR检测结果显示,ALDH1阳性细胞内miR-9基因表达明显低于ALDH1阴性细胞,差异有显著性意义(P < 0.05),见图1


图2 各组 ALDH1 阳性甲状腺乳头状癌干细胞的 miR-9 基因表达

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结果:实验检测了转染miR-9模拟物、miR-9抑制物、miR模拟物对照的ALDH1阳性细胞及未转染ALDH1阳性细胞内的miR-9基因表达,发现miR模拟物对照组miR-9基因表达与未转染组比较差异无显著性意义(P > 0.05),排除了miR模拟物对照对miR-9基因表达的影响;miR-9模拟物组miR-9基因表达高于miR模拟物对照组(P < 0.05),miR-9基因表达是miR模拟物对照组的1.78倍;miR-9抑制物组miR-9基因表达低于miR模拟物对照组(P < 0.05),miR-9基因表达较miR模拟物对照组下降了58.67%,结果见图2。因此后续实验选择了miR-9模拟物组、miR-9抑制物组、miR模拟物对照组进行检测。



图3 各组 ALDH1 阳性甲状腺乳头状癌干细胞的增殖情况

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结果:MTT检测显示,随着观察时间的延长,各组细胞的吸光度值呈逐渐增加趋势;培养第1天时,各组细胞吸光度值比较差异无显著性意义(P > 0.05);培养第2天,miR-9模拟物组吸光度值低于miR-9抑制物组、miR模拟物对照组(P < 0.05),并且miR-9抑制物组吸光度值高于miR模拟物对照组(P < 0.05);培养的第3-5天,miR-9

模拟物组吸光度值低于miR-9抑制物组、miR模拟物对照组 (P < 0.05)miR-9抑制物组吸光度值高于miR模拟物对照组(P < 0.05),见图3



图4 转染 48 h 后各组 ALDH1 阳性甲状腺乳头状癌干细胞的凋亡(Tunel 染色,×200)

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结果:Tunel染色显示,miR-9模拟物组细胞核固缩,细胞体积较小,呈棕黄色或黄褐色颗粒,细胞凋亡明显;miR-9抑制物组、miR模拟物对照组细胞凋亡少于miR-9模拟物组,见图4


图5 转染 48 h 后各组 ALDH1 阳性甲状腺乳头状癌干细胞凋亡蛋白的表达

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结果:Western Blot检测显示,与miR模拟物对照组比较,miR-9模拟物组细胞Bcl-2蛋白表达减少(P < 0.05),Bax蛋白表达增多(P < 0.05);与miR模拟物对照组比较,miR-9抑制物组Bcl-2蛋白表达增多(P < 0.05),Bax蛋白表达减少(P < 0.05),见图5



图6 转染 48 h 后各组 ALDH1 阳性甲状腺乳头状癌干细胞的迁移能力(结晶紫染色,×200)

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结果:Transwell小室显示,miR-9模拟物组、miR模拟物对照组、miR-9抑制物组的穿膜细胞数分别为69.81±10.23,203.14±6.78,537.29±6.31,miR-9模拟物组穿膜细胞数少于miR模拟物对照组(P < 0.05),miR-9抑制物组穿膜细胞数多于miR模拟物对照组(P < 0.05),见图6



图7 转染 48 h 后各组 ALDH1 阳性甲状腺乳头状癌干细胞的迁移相关蛋白表达

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结果:Western Blot检测显示,与miR模拟物对照组比较,miR-9模拟物组细胞基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9蛋白表达减少(P < 0.05),miR-9抑制物组细胞基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9蛋白表达增多(P < 0.05),见图7


图片来源

韩 菲,秦海霞. miR-9对甲状腺乳头状癌干细胞体外增殖及迁移能力的影响[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(21): 3404-3409.


文章快速阅读

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文题释义

miR-9是miRNA中的一个亚型,广泛存在于不同物种中,miR-9表达紊乱可导致基因表达异常,从而在癌症的发生、转移及复发中发挥重要作用,其在乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、胃癌、鼻咽癌及血液系统恶性肿瘤的发生与发展中发挥着重要作用。

乙醛脱氢酶1(ALDH1)是一类存在于细胞浆的酶类,广泛分布于不同的组织中,具有高度氧化活性,在氧化视黄醇为视黄酸过程中参与基因的表达和组织分化,乙醛脱氢酶1高表达在多种肿瘤组织中可作为肿瘤干细胞的标记,在肿瘤的诊断、治疗、判断预后中具有一定的作用。


文章摘要

背景:miR-9在各类型肿瘤及肿瘤不同发生发展阶段的作用不一样,而对于其在甲状腺乳头状癌中的作用目前尚不清楚。

目的:分析miR-9基因对甲状腺乳头状癌干细胞体外增殖及迁移能力的影响。

方法:实验采用流式细胞仪从人乳头状甲状腺癌细胞中分选ALDH1阳性细胞,实时反转录PCR检测miR-9基因的表达。取对数生长期的ALDH1阳性细胞,分别转染miR-9模拟物、miR-9抑制物或miR模拟物对照,48 h后采用qRT-PCR检测miR-9转染效率,MTT实验、Tunel法、Transwell小室实验检测细胞增殖、凋亡、迁移能力,Western Blot 检测凋亡相关蛋白Bcl-2Bax及迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9的表达。

结果与结论:miR-9模拟物组miR-9基因表达高于miR模拟物对照组(P < 0.05)miR-9抑制物组miR-9基因表达低于miR模拟物对照组(P < 0.05),说明实验转染成功;与miR模拟物对照组比较,miR-9模拟物组细胞增殖能力和迁移能力下降,细胞凋亡增多,而miR-9抑制物组细胞增殖能力和迁移能力增强,细胞凋亡减少;与miR模拟物对照组比较,miR-9模拟物组Bcl-2蛋白减少、Bax蛋白增多(P均< 0.05)miR-9抑制物组Bcl-2蛋白增多、Bax蛋白减少(P均< 0.05)与miR模拟物对照组比较,miR-9模拟物组基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9表达减少(P < 0.05)miR-9抑制物组基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9表达增多(P < 0.05)结果显示,miR-9可抑制甲状腺乳头状癌干细胞的体外增殖及迁移,促进细胞凋亡。


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http://www.crter.org/CN/article/openArticlePDF.jsp?id=14746