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两种方法培养人胎盘间充质干细胞的生物特性比较

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图1   不同方法获得的原代胎盘间充质干细胞的形态

结果:胰酶冷消化法在消化种植后2-4 d即可发现细胞贴壁生长,最早贴壁时间为(3.20±0.75) d,培养7 d后细胞逐渐增殖,呈漩涡状生长,随着细胞密度的增加,胞体变得细长,大体呈长梭形,少数细胞体积较大,不规则。长满瓶底需两三周,原代培养周期为(17.00±2.53) d,传代后细胞生长速度增快,3-5 d即可传下一代,见图1



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张 飞,王 武,李慧娟等. 两种方法培养人胎盘间充质干细胞的生物特性比较[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(33): 5292-5296.


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文题释义

胎盘间充质干细胞的优势:胎盘源性间充质干细胞可大量获得,具有增殖和分化能力,可与胚胎干细胞相媲美,因此胎盘间充质干细胞已逐渐成为应用前景广阔的种子细胞。根据课题组以往经验,胎盘间充质干细胞的原代培养较骨髓间充质干细胞更为困难,需要保证严格的无菌条件及胎盘组织的新鲜度。
胰酶冷消化法的优势:胰酶具有解离细胞之间糖蛋白和黏蛋白的功能,从而破坏细胞骨架,达到分离细胞的目的,故对细胞膜蛋白有很强的破坏性,容易导致细胞损伤,从而影响细胞的传代和培养。而胰酶冷消化法(4 ℃)具有实验条件简单、胰蛋白酶用量少、节约人力物力等优点,而且对细胞损伤相对较轻。

文章摘要

背景:胎盘间充质干细胞能够为细胞治疗提供理想的种子细胞,但其培养未曾使用过胰酶冷消化法,故对此方法进行探索,并与组织块法进行比较,从中筛选出一种方便易行、培养成功率更高的方法。
目的:观察胰酶冷消化法与组织块法分离培养的人胎盘间充质干细胞的生物学特性。
方法:采用胰酶冷消化法和组织块法从人胎盘中分离、纯化和传代培养人胎盘间充质干细胞(n=6)。记录胎盘间充质干细胞首次出现时间及原代培养周期,绘制第3代细胞生长曲线,流式细胞仪分析第3代细胞表面标志,检测其向成神经及成脂方向诱导分化能力。
结果与结论:使用上述2种培养方法均可获得胎盘间充质干细胞,胰酶冷消化法首次出现贴壁细胞时间早于组织块法(P < 0.05),原代培养周期短于组织块法(P < 0.05);②生长曲线提示在进入平台期后的各个时间点胰酶冷消化法培养的细胞数量明显多于组织块法(P < 0.05);③2种细胞具有均一的细胞表型,均表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45;④2种方法培养的胎盘间充质干细胞经诱导后均具有成神经及成脂分化潜能;⑤上述结果表明,对于胎盘间充质干细胞的培养而言,胰酶冷消化法具有明显优势。

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http://www.crter.org/CN/article/openArticlePDF.jsp?id=14054